Diagnostifikimi PCR - Analiza e infeksionit


Reaksion zinxhir polimeraza (PCR) - metodë shumë të saktë të diagnozës molekulare-gjenetike, e cila lejon një person për të zbuluar sëmundje të ndryshme infektive dhe trashëgimore, fazë të dy akute dhe kronike dhe shumë kohë para se sëmundja mund të shfaqet.

Reaksion zinxhir polimeraza (PCR) në vitin 1983 të zhvilluara Myullisa Cary (SHBA), për të cilën në vitin 1993 ai u nderua me Çmimin Nobel në kimi.

Analiza PCR për shumicën e infeksioneve të bëhet një lloj "standard ari". Shumica e profesionistëve të përballen me atë pothuajse çdo ditë dhe nuk mund të imagjinohet pa diagnozën definitive. PCR shpesh bëhet i vetmi reagim për të identifikuar fazat aktive të sëmundjes në ato momente kur të tjerët dështojnë bakteriologjike, virologjike, metoda imunologjike diagnostike.


Avantazhet e diagnozës PCR në mjekësi moderne:

• Zbulimi i drejtpërdrejtë i pranisë së patogjen (dmth, fusha të caktuara të ADN-patogjen ose ARN) në mostër.
• specifikat e Lartë mund të përcaktojë një shtrirje të veçantë të ADN ose ARN të veçantë në patogjen, i cili eliminon mundësinë e reagimeve të rreme.
• Ndjeshmëria e lartë PCR lejon për të zbuluar patogjene edhe qelizë e vetme (viruset, bakteret). Ndjeshmëria e analizave PCR është 10-1000 qeliza në mostër (p.sh., imunitar ndjeshmëri dhe testet mikroskopike - vetëm 103-105 qelizat).

• Zhvillimi i një metodat Universale PCR për zbulimin e patogjenëve të ndryshme. Objekti i studimit për PCR është materiali gjenetik (ADN, ARN) të parazitit. Teknika mund të zbulojë patogjene të shumta nga një mostër biologjike.
• Mjaft rezultatet e testit të shpejta. Hulumtimi i plotë i kryer për 4-4,5 orë, të paktën - disa më të gjatë.
• Aftësia për të identifikuar patogjene për shfaqjen e simptomave (diagnoza paraklinike) dhe pas sëmundjes së kaluar (diagnozën retrospektive). Shembuj diagnoza paraklinike do të shqyrtohen në periudhën e inkubacionit (nga koha e infektimit të pacientit e ankesave) dhe infeksion latent (kur nuk ka simptoma në të gjitha, por nuk ka prova laboratorike - PCR, për shembull). Një nga pikat kryesore është një PCR diagnostike PCR në material arkivor apo mbetjeve biologjike të rëndësishme për identifikimin apo atësisë.

Aktualisht PCR diagnostifikimi është në mënyrë të konsiderueshme të zhvillimit. Nuk është përmirësimi i metodës, kohë dhe përsëri, ka lloje të reja të PCR, tregu mjekësore po hyn në një sistem të ri provë për këtë reagim. Kjo kosto-PCR studion çdo vit bëhet më e qasshme për një gamë të gjerë të pacientëve.

Çfarë PCR bazuar

Baza e reaksion zinxhir polimeraza përsëritet dyfishuar (përforcim) e seksioneve të caktuara të ADN ose ARN nga enzimat në laborator. Rezultati është shuma e ADN ose ARN mjaftueshme për analiza vizuale. Studimi është kopjuar vetëm pjesa që i përshtatet kushteve të specifikuara, dhe vetëm në prani të situatës së tij në mostër studiuar.

Për shembull, materiali për studim, i cili parashikon praninë e fragmente ADN ose ARN patogjen (pështymë, gjaku, urina, shkarkimin nga organet gjenitale), të vendosura në një reaktor të veçantë (Thermocyclers). Tjetër për të janë shtuar enzimat specifike që lidhin të patogjen ADN ose ARN dhe sintezën e kopjeve. Kjo kopje është disa hapa tipit "reaksion zinxhir", dhe do të përfundojë me një kopje të materialit gjenetik mund të prodhojë qindra ose mijëra kopje. Pastaj vjen analizën dhe krahasimin e rezultateve me bazën e të dhënave në dispozicion në strukturën e patogjene të ndryshme. Përdorimi i PCR nuk mund të identifikojë llojin e patogjen, por edhe për të dhënë një rezultat sasior të analizës, pra sa më shumë patogjene në njerëzit.

PCR tani është zgjeruar gamën e mundësive të studimeve: futjen e mutacioneve, shkrirjes së fragmenteve të ADN-së dhe e përhapur në mjekësi, për shembull, krijimin e atësisë, pamjen e gjeneve të reja dhe më shumë.

Çfarë infeksione mund të zbulohet nga PCR diagnostifikim

1) HIV (mund të zbulojë virusin mungesës së imunitetit njerëzor HIV-1)
2) hepatitis viral A, B, C, G (RNA-HAV, DNA-HBV, HCV-RNA, RNA-HGV)
3) mononukleoza infektive (Virusi ADN -VEB Epstein-Barr)
4) infeksion Tsytomehalovyrusnaya (DNA-CMV)

5) infeksion herpetike (herpes simpleks virus DNA i HSV 1 dhe 2)
6) IST (infeksionet, infeksionet seksualisht të transmetueshme) - ureaplasmosis, gardnerellez, klamidia, mycoplasmosis, trichomoniasis,
7) Tuberkulozi (Mycobacterium tuberculosis)
8) viruset onkogjenik - infeksion virus (virus papilomë humane (duke përfshirë llojet e saj onkogjenik 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, dhe 59)
9) Borreliosis, tik-tak-përballohen encefalit
10) Listerioza
11) Candidiasis (kërpudhave të gjinisë Candida)
12) Infeksioni Pylori (Helicobacter pylori)

dhe të tjera

Duke pasur parasysh gama e patogjenëve PCR diagnostifikimi është përdorur gjerësisht në gjinekologjike, praktikë urological, praktikë, sëmundje infektive, në Pneumologji, e tuberkulozit, Gastroenterology, hematologjisë, onkologjisë dhe të tjerët.

Materiale për studime dhe rregullat e gardhit

Materiali për studim PCR që mund të zbulojë bakteret e ADN-së huaj ose ADN ose ARN mund të shërbejë për një shumëllojshmëri të lëngjeve biologjike dhe të drejtave mjedisore: mukusit, urinë, gjak, pështymë, gërryerjeve qelizave epiteliale, indeve placenta gjak, lëng prostatës, lëngut amniotik, lëngu pleural.

Provimi për infeksionet, infeksionet seksualisht të transmetueshme (IST) në mesin e burrave dhe grave të ngjiten shkarkesë nga shtupë gjenital ose scraping nga qafën e mitrës, scraping ose shtupë e uretrës (uretrës), urinë.

Provimi për infeksionet (infeksion herpes, CMV, mononukleoza, toxoplasmosis, hepatiti B dhe C, infeksioni HIV) PCR në gjakun e marrë.

Për diagnozën e mononucleosis infektive, CMV, infeksion herpes i tampon fytit është marrë për testim për CMV - urinës. Shpesh për studim në sistemin nervor, në një numër studimesh të ndërmarra lëngun cerebrospinal.

Në materialin Pulmonology është pështymë, lëngu pleural.

Provimi për intrauterine infeksion - lëngut amniotik, ind placentar.

Përgatitja për materiale depozitave dhe PCR diagnostifikim

Pothuajse të gjithë pacientët që kryenin PCR diagnostifikim, të mbështeteni në një të besueshme, të sakta dhe të shpejta rezultatet, të cilat varet shumë nga aftësia e laboratorit, mjekët profesionale laboratorike. Megjithatë, shumë nuk mendoj se kjo është besueshmëria në masë të madhe varet nga ne, përkatësisht rekomandimet e mjekut të ndjekin, mënyrën e jetesës dhe mbledhjen e të saktë të materialit. Në mbledhjen e kushteve materiale të nevojshme që përjashtojnë kontaminimit (ndotjes) e materialit dhe, për këtë arsye, në dyshim objektivitetin e analizave.

Përgatitja e duhur për dorëzimin e materialit nuk paraqet shumë vështirësi. Rekomandimet e mëposhtme të mjekëve për pacientët:

1) ishin seksualisht aktiv nga dita e dorëzimit të materialit;
2) për të studiuar gjaku shfaqet në mëngjes në një stomak bosh (nuk hanë, pije);
3) në kohën urine grumbullohen në pjesën e mengjesit të enës së parë të pastër sterile.

Kushtet gatishmëri Analiza PCR

Rezultati përfundimtar është gati në ditët 1,5-2h pas dorëzimit të materialit. Në disa raste, rezultati është gati në ditën e parë.

Shpjegimi PCR

Negativ PCR rezultat tregon se materiali provë në momentin e dorëzimit nuk është gjetur asnjë gjurmë të agjentëve infektivë. Shumica e rasteve nuk tregon infeksion, i cili u përpoq për të gjetur në mostrën e studimit.

Pozitiv PCR pikë për të zbuluar shenjat e infeksionit në studimin e mostrës biologjike. Me saktësi të madhe rezultat pozitiv tregon praninë e infeksionit në çdo kohë të dhënë.

Ka situata ku PCR zbuluar pozitive për infeksion aktiv dhe nuk mund të flasin - të ashtuquajturin "bartës të shëndetshme" pa simptoma klinike të sëmundjes që nuk kërkon trajtim, por kërkon të ndjekin-up nga një mjek. Nuk është më në një numër të infeksioneve virale (HPV, CMV, EBV infeksion, infeksion herpes, etj) në materiale të tilla si pështymë, scraping qafën e mitrës, uretrës, dmth fokus lokal. Por ne nuk mund të harrojmë se transmetimin e mediave në dispozicion të njerëzve të shëndetshëm si një tranzicion në formën kronike të sëmundjes me procesin e aktivizimit. Nëse PCR gjaku pozitiv, kjo nuk është bartës dhe kërkon trajtim të veçantë.

Sasiore PCR vlerësohet nga një mjek në mënyrë individuale për një infeksion të veçantë veç e veç dhe nuk është e ndarë shkallëzime. Bazuar në mjeku sasiore PCR mund të krijojnë shkallën e veprimtarisë së infeksionit dhe të përgatisë terrenin e sëmundjes, që sigurisht ndikojnë në rrjedhën dhe doza e drogës për qëllim.

Një nga pyetjet më të fundit emocionuese: si i saktë diagnoza PCR?

Për analizën e PCR, ka 3 përkufizime:

1. Saktësia (me probabilitet të lartë mund të identifikojë ose mungesa e infeksionit).

2. specifike (saktësia e zbulimit të një infeksioni veçantë).
3. ndjeshmërisë (edhe në një përmbajtje të ulët të materialit gjenetik patogjene në mostër është zbuluar infeksion).

Reaksion zinxhir polimeraza praktikisht nuk i jep false positives (dmth nuk ka teste pozitive ku ka infeksion). Rezultatet e rrejshme negative janë të rralla (shpesh kjo është për shkak të mungesës së një infeksioni aktive të njerëzve në këtë moment). Për shembull, infeksion latent, infeksion kronik aktivitet jashtë.